- Oligonucleotide
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Oligonucléotide
Les oligonucléotides sont des courtes séquences de nucléotides (ARN ou ADN), simple-brin et longs de quelques dizaines de bases. Ils sont en général obtenus par synthèse chimique.
Sommaire
Synthèse des oligonucléotides
Article détaillé : Synthèse d'oligonucléotide.
La synthèse d'oligonucléotide est une technique, très utilisée dans les laboratoires qui permet d'obtenir un accès inédit ou peu couteux a des oligonucléotides avec la séquence de nucléotides désirée. La technique a pour point de départ un support solide sur lequel est greffé le premier nucléotide. La synthèse s'effectue de manière automatisée grace à un synthétiseur depuis la fin des années 1970. Une fois la synthèse terminée, l'oligonucléotide va être séparé du support solide par un clivage chimique. Cette méthode permet d'obtenir des oligonucléotide ADN, ARN ou mixte ainsi que des oligonucléotides modifiés. La synthèse d'oligonucléotides a connu un essor ces dernières années. De très nombreux synthétiseurs sont disponibles sur le marché et permettent une synthèse automatisée d'oligonucléotides; Les besoins croissant en oligonucléotide proviennent du développement de techniques comme la PCR , les puces à ADN.Utilisation des oligonucléotides
Article détaillé : hybridation moléculaire.L'hybridation des acides nucléiques est une technique fondamentale, basé sur la capacité des acides nucléiques simple brin de s'associer pour former une molécule double brin. Les méthodes d'hybridation utilisent des oligonucléotides marqués, appelé sonde. Ces oligonucléotides, placés dans un milieu très complexe contenant de nombreuses molécules non marquées d'acide nucléique vont s'associer uniquement avec celles qui ont une séquence complémentaire. Les oligonucléotides sont donc souvent utilisés comme sondes afin de détecter des ADN ou ARN complémentaires.
ADN
Comme exemples d'utilisation des oligonucléotides ADN on peut citer :
- Les puces à ADN.
- La technique du Southern blot.
- La technique FISH. (Fluorescent In Situ Hybridization)
Les oligonucléotides d'ADN (déoxyoligonucléotides) sont souvent utilisés pour la PCR (Polymerase Chain Reaction), procédé permettant d'amplifier presque n'importe quel morceau d'ADN. Dans ce cas, l'oligonucléotide est souvent désigné sous le nom d'amorce. Ceci va générer une "cible" pour une polymérase qui va pouvoir lier et pour prolonger l'amorce par l'addition de nucléotides.
ARN
Les oligonucléotides d'ARN sont synthétisés pour obtenir
- Des ARN antisens
- Des ARN possédant une activité enzymatique, appelés des ribozymes.
- Des ARN interférents
Dans l'"argot de la science", les oligonucléotides sont appelés 'oligos.Quantification
Les oligonucléotides sont quantifiés par mesure d'absorbance dans une cuve en quartz à une longueur d'onde de 260 nm à l'aide d'un spectrophotomètre UV. A partir de cette densité optique, la concentration et quantité de matière d'oligonucléotide peuvent être calculées.
Voir aussi
- Aptamère — oligonucléotides avec d'importantes applications biologiques
Portail de la biologie cellulaire et moléculaire
Catégorie : Acide nucléique
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