Dosage Colorimétrique

Un dosage colorimétrique est possible lorsque qu'une réaction chimique donne des produits colorés et si l'intensité de la coloration est proportionnelle à la concentration de l'élément à doser. Les dosage colorimétriques s'appuie sur la loi de Beer-Lambert.

Un dosage colorimétrique est également possible en utilisant des indicateurs colorés tels que l'hélianthine, la phénol phtaléine, le vert de bromocrésol etc. qui vont se colorer à pH différents et de ce fait, vont pouvoir indiquer quand on atteint l'équivalence.

Loi de Beer-lambert

La forme utilisé est la suivante :

• A : absorbance de la solution sans unité
• ε : coefficient d'extinction molaire en L×mol^-1×cm^-1 (parfois noté avec un ξ)
• l : longueur de cuve traversée par la lumière en cm
• C : concentration molaire en mol×L^-1

La mesure de l'absorbance est donnée par un spectrophotomètre qui mesure la densité optique. Plus une solution est colorée, plus la lumière a du mal à traverser , donc plus l'absorbance de la solution augmente.

Protocole général des dosages colorimétriques

Conditions générales de réalisation

Pour réaliser un dosage colorimétrique, certaines conditions doivent être remplies :

• la réaction doit donner une coloration proportionnelle à la concentration
• la coloration doit être stable le temps de faire les mesures
• le composé à analyser doit être dans des concentrations très faibles
• la gamme étalon doit être réalisée dans les mêmes conditions physico-chimique que les essais
• la longueurs d'onde du spectrophotomètre doit être celle qui permet la plus forte absorbance possible

si ces premières conditions sont remplies, un dosage colorimétrique peut être possible.

Réalisation d'une gamme d'étalonnage

Pour régler le spectrophotomètre, la réalisation d'une gamme d'étalonnage est indispensable (sauf pour les kits vendus dans le commerce). La gamme d'étalonnage permet de déterminer une absorbance à une longueur d'onde donnée pour une concentration en composé recherché. Il faut donc préparer une solution de l'élément à doser de faible concentration. Lors de la réalisation de la gamme, le volume de solution doit être identique dans tout les tubes. Or les volumes de réactifs doivent rester constants pour permettre la réaction et les quantités de composé à doser doivent varier dans chaque tube. Il faudra donc compléter avec de l'eau distillée à un même volume pour que les tubes soit au même niveau de solution. Un tube 0 ou blanc doit impérativement être réalisé pour annuler l'absorbance due aux réactifs eux-mêmes. Ce tube ne contient pas de composé à doser La réalisation des gammes d'étalonnage demande beaucoup de précision, et doit être de préférence, réalisée dans les mêmes conditions que les essais.

Réalisation d'un tableau colorimétrique

Pour vous aider, la réalisation d'un tableau colorimétrique permet d'éviter des erreurs lors de la réalisation de protocoles fastidieux et de noter vos résultats. Voici en exemple le tableau colorimétrique du Dosage du glucose par le DNS.

Lecture des résultats

Lors de l'obtention des valeurs d'absorbances (Densités Optiques), il faut tracer la droite d'absorption en fonction des quantités de composé par tube.

En bleu, la droite obtenue par la gamme d'étalonnage. En rouge, les absorbances obtenues par les essais qui par lecture graphique, donnent la quantité de matière dans le tube

La droite doit passer par l'origine du repère et par toutes les valeurs si le dosage a été bien réalisé. Reportez à cette droite les valeurs d'absorbance de vos essais pour déterminer la quantité de composé présent. Pour remonter à la concentration en composé présent dans le produit, n'oubliez pas les dilutions possibles ou les quantités de matière qui ont été utilisées.

Voir aussi

• Dosage du glucose par le DNS
• Méthode de Briggs

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