- Dosage du glucose par le dns
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Dosage du glucose par le DNS
Le dosage du glucose par le DNS est un dosage colorimétrique du glucose.
Sommaire
Principe
On utilise les propriétés réductrices du glucose. À chaud et en milieu alcalin, il y a réduction de l'acide 3,5-dinitrosalycilique : DNS (acide 2-hydroxy-3,5-dinitrobenzoïque) qui joue le rôle d'oxydant, le glucose étant le réducteur.
- Réaction de réduction de l'acide 3,5-dinitrosalicylique en acide 3-amino-2-hydroxy-5-nitrobenzoïque (3-amino-5-nitrosalicylique) :
- Le glucose, quant à lui est oxydé en divers produits d'oxydation :
L'acide 3-amino-5-nitrosalicylique est un composé rouge. Cette réaction n'est pas stœchiométrique : il n'y a pas de bilan d'oxydoréduction. L'intensité de la coloration rouge est proportionnelle à la concentration de l'ose si l'on opère dans des conditions physico-chimiques constantes. Les droites d'étalonnage ne passent pas toujours par l'origine.
Cette méthode n'est pas applicable au dosage d'un mélange complexe de glucides réducteurs.
Protocole
matériel
- Spectrophotomètre ;
- Tubes à essais lavés et secs ;
- Pipette automatique ;
- Bechers ;
- Cuves à spectrophotomètre.
Solutions
- DNS;
- Solution de glucose à 0,005 mol/L ;
- Eau distillée ;
- Solution à doser.
Étapes
Préparation de la gamme d'étalonnage
Dans une série de tubes :
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- introduire 0-0,2-0,4-0,6-0,9-1,2 mL de solution de glucose à 0.005 mol/L
- Ajuster chaque tube à 2,5 mL avec de l'eau distillée
- Ajouter 1mL de réactif 3-5 DNS
Mélanger et boucher les tubes avec du coton cardé et du papier aluminium. Porter au bain marie à 100°C pendant 5 minutes exactement. Refroidir et ajouter 7,5 mL (Qsp 10ml) d'eau distillée dans chaque tube, homogénéiser et laisser reposer pendant 15 minutes. Lires les absorbances à 540 nm contre le témoin.
Essais
Ils sont à traiter dans les mêmes conditions opératoires.
Réaliser le dosage avec des prises d'essais de 0,5 ml diluées convenablement additionnées d'1ml d'eau distilée et d'1ml de DNS.Tableau colorimétrique ( résultats expérimentaux ) Tubes 0 1 2 3 4 5 Solution de glucose à 0,005 mol/L en mL 0 0,2 0,4 0,6 0,9 1,2 Eau en mL 1,5 1,3 1,1 0,9 0,6 0,3 DNS en mL 1 1 1 1 1 1 Quantité de glucose en M 0 0,002 0,004 0,006 0,009 0,012 Ce tableau représente ce qui doit être mis dans chaque tube et en quelle quantité.
Catégorie : Technique de laboratoire
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