Catalase négative

La catalase est une enzyme (N° EC 1.11.1.6) catalysant la dismutation de l'eau oxygénée (peroxyde d'hydrogène) :

2H₂O₂ → O₂ + 2H₂O

Elle est formée de quatre chaînes polypeptidiques d’environ 500 acides aminés, comportant chacune un groupe hème. Ces hèmes et leur environnement protéique sont les sites actifs de cette enzyme. Pour catalyser la réaction, l’atome de fer du groupement hème de la catalase réalise une coupure hétérolytique de la liaison O-O du péroxyde d'hydrogène, créant de ce fait une molécule d’eau et un groupement Fe(IV)=O hautement oxydant ; ce dernier peut ensuite oxyder une autre molécule de péroxyde d'hydrogène pour donner du dioxygène. Ce processus est illustré plus spécifiquement par les équations suivantes :

H₂O₂ + Fe(III)-E → H₂O +O=Fe(IV)-E (1)

H₂O₂ + O=Fe(IV)-E → O₂ + Fe(III)-E +H₂O (2)

Avec une vitesse maximale de 200 000 réactions cataliques par seconde, elle est une des enzymes les plus efficaces connues. Sa vitesse de réaction ne semble en effet limitée que par la diffusion, c’est-à-dire par la vitesse limite avec laquelle les molécules parviennent au site actif de l'enzyme. Chez les eucaryotes on la trouve dans le peroxysome des cellules.

On trouve la catalase chez tous les organismes aérobies et plus particulièrement dans les navets ou dans la plupart des racines des plantes, dans la levure et dans le foie des animaux.

Usage en microbiologie

Cette enzyme est utilisée en bactériologie systématique pour l'identification des bactéries. Il s'agit de mettre en contact une colonie de la bactérie à étudier en présence d'eau oxygénée (à 10 volumes). Une effervescence (dû à un dégagement de dioxygène) signe la présence d'une catalase.

La plupart des bactéries à gram négatif possédent une catalase (catalase +). La recherche de la catalase sur ce type de bactéries ne présente donc aucun intérêt, sauf un sérovar de Shigella dysenteriae. Pour les bactéries à gram positif, la recherche de cette enzyme permet de différencier:

• les Staphylococcus et Micrococcus ( catalase +)
• les Enterococcus, Streptococcus, Pediococcus, Enterrococcus, Lactococcus et Leuconostoc ( catalase -)

Technique

• Sur une lame de verre propre, déposer une goutte de H₂O₂, puis la mettre en contact avec une colonie isolée, prélevée directement avec une pipette pasteur boutonnée ou une anse plastique à usage unique. Il ne faut pas utiliser une anse en métal car elle serait alors oxydante.
• Si formation de bulle, la bactérie possède la catalase.
• Si rien n'est observable, la bactérie ne possède pas l'enzyme.

Remarques : Ne pas utiliser d'anse de platine, car elle réagit avec H₂O₂ et donne un faux positif. Il est déconseillé de faire ce test à partir d'un bouillon de culture ensemencé, car le résultat est moins net. En cas de doute sur le résultat, recommencer avec une plus grosse colonie.

Rôle du test "catalase" dans l'identification d'une espèce

Ce test est important pour la première orientation dans l'identification d'une souche pure bactérienne il permet de différencier les bactéries catalase +/-.

pour effectuer l'identification complête d'une bactérie il faut connaître le type respiratoire. Les bactéries Gram + possède pour la plupart un type respiratoire aénaérobie/aérobie facultatif (AAF) (cf Viande Foie (gélose) ), sauf le genre microccocus (type AS).

il faudra donc poursuivre l'identification de la souche par l'ensemencement de milieux: sélectifs, hostiles, ou faisant partie de la batterie de test prévue pour la différenciation des genres et l'identification de la bactérie. exemple : Recherche de la voie d'attaque du glucose.

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