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Clinostat
Un clinostat (ou Klinostat) est un appareil de laboratoire qui utilise la rotation pour réduire les effets de la gravité sur la croissance de végétaux (étude du forcage du développement cellulairegravitropisme) ou embryonnaire (gravimorphisme) par la gravité.
Clinostat à axe simple utilisé pour simuler l'absence de pesanteur et d'éclairage directionnel chez une plante
Un clinostat a par exemple été utilisé pour l'étude des changements de production de certaines protéines chez la plante de la boratoire Arabidoptis en situation de micro-pesanteur [1]
Sommaire
Histoire
Le premier clinostat connu sous ce nom par l'histoire des sciences a été inventé et breveté [2] par Julius von Sachs au tout début du XXème siècle [3], mais en 1703 Denis Dodart avait déjà conçu un système similaire.
Le premier clinostat à moteur électrique daterait de 1897, réalisé par Newcombe [4].Principe et description
- Le « clinostat à axe simple » (aussi appelé « clinostat horizontal ») est formé d'un disque rigide attaché à un moteur. Ils s'agissait originellement d'un simple mécanisme d'horlogerie aujourd'hui remplacé par un moteur électrique. Le disque est tenu verticalement et le moteur tourne lentement (environ un tour par minute). Une rotation circulaire uniforme autour de l'axe horizontal crée un vecteur gravité normale balaye 360° autour de l'objet biologique à chaque révolution.
Si cette objet est par exemple une plante attachée au centre du disque de manière à ce qu'elle soit en position horizontale (dans l'axe du Clinostat), la rotation lente de l'axe diminue la force gravitationnelle (de plus de 360 degrés), simulant ainsi une partie des conditions de l'apesanteur. On a fait de même pour des cultures de cellules animales.
Pour simuler l'absence de gravité, le Clinostat simple doit être parfaitement horizontal. Si le Clinostat fait un angle avec l'horizontale, un vecteur de gravité est alors perçu, qui augmente avec l'angle par rapport à l'horizontale. On peut ainsi par exemple simuler la gravité lunaire ou marsienne.
- Un clinostat 3xD, ou Clinostat à deux axes (ou RPM pour random positioning machine pour les sanglosaxons) permet de simuler un effet anti-gravitationnelle dans toutes les directions.
Ces machines se composent souvent de deux cadres, l'un placé à l'intérieur de l'autre, chacune tournant de façon indépendante à une certaine vitesse, permettant la rotation d'échantillons dans tous les plans. Certains de ces clinostats peuvent aussi fonctionnner comme un clinostat 2-D (0,1 à 20 rpm) ou inversement comme centrifugeuse (1 - 1,1 g)[5].
Autres usages et découvertes
Des clinostats ont aussi été utilisés pour annuler des stimuli autres que la gravité (par exemple la directionnalité des effets du soleil) On a ainsi pu montrer que les plantes ne réagissent à la gravité que si la gravistimulation est maintenue durant plus qu'une certaine quantité critique de temps (qui varie selon l'espèce, les organes ou l'âge de la plante, et qui est dit "temps de présentation minimale"(MPT ou " minimal presentation time "pour les anglosaxons). Pour de nombreux organes végétaux, le MPT se situe entre 10 et 200 secondes. Si un clinostat est à plusieurs reprises arrêté à une position unique, même pour un temps aussi bref que 0,5 s, ces arrêts peuvent entraîner une réponse gravitropique [6]. Les animaux sont bien moins sensibles, leur "temps de présentation" est de un ou deux ordres de grandeur plus rapide ce qui impose l'utilisation de clinostats en rotation rapide, par exemple pour étudier des cultures de cellules animales et le développement d'embryons.
Problèmes associés à l'utilisaton d'un clinostat
- Les clinostats tournent généralement à faible vitesse (Clinostat «rotation lente»), pour limiter les effets centrifuges Il ya eu débat quant à la vitesse de rotation la plus approprié, car si elle est trop lente, la plante ou l'animal a le temps d'élaborer des réponses physiologiques à la gravité, et si elle est trop rapide, la force centrifuge s et les tensions mécaniques seront responsables d'artefacts.
Pour la simulation de culture de végétaux à faible pesanteur, la vitesse de rotation optimale a dès la fin des années 1960 été calée sur celle «vraies» réponses à la microgravité comme on les voit dans l'espace [7] ; Elle est programmée entre 0,3 et 3 tours/min pour la plupart des systèmes fabriqués en usine.
- La vitesse de rotation d'un clinostat (généralement de 30 à 150 tr / min) ne convient qu'à de petits échantillons (cultures cellulaires en flacons de quelques mm de diamètre), généralement en suspension dans des milieux liquides. Dans ces conditions des effets centrifuges importants sont évités. Il existe des clinostats lents (rotations :0 à 5 rpm ) ou rapides (20 à 200 rpm) permettant de travailler avec plusieurs dizaines d'échantillons de cultures à la fois.
- Un Clinostat à seul axe (ou « clinostat 2xD ») ne simule réellement l'apesanteur sur son axe de rotation.
Dans tous les cas, des artefacts induits par les vibrations du moteur ou des articulations, et d'autres effets du système sont à envisager.Alternative
Pour de premières expériences portant sur des cellules, organes ou espèces peu complexes, une alternative au clinostat peut être la « machine à chute libre » (FFM pour "free fall machine" pour les anglo-saxons).
De petits échantillons (suspensions de cellules) sont soumis à une chute libre, déterminée par la gravité terrestre, sur environ un mètre, de hauteur et une période de chute libre d'un peu moins d'une seconde. Les échantillons sont ensuite repoussé vers le haut de l'appareil par un mécanisme approprié, et ainsi de suite.. Le «rebond» est répété mais la majeure partie du temps est passé en chute libre "à zéro g ". Ces séquences à g élevés sont censés être trop courte pour être détectée par le mécanisme physiologique de la plupart des échantillons biologiques, dont on estime qu'ils ne perçoivent alors que le temps passé en chute libre.Voir aussi
Articles connexes
Liens externes
- (en) The Clinopage ; page Web dédiée à l'étude des conditions de l'espace, sur terre
- (en) Clinostats Page web consacrée aux expériences sur la gravité
Bibliographie
Notes et références
- ↑ Time-course of changes in amounts of specific proteins upon exposure to hyper-g, 2-D clinorotation, and 3-D random positioning of Arabidopsis cell cultures ; Barjaktarović Z., et al. ; 2007 ; J Exp Bot. vol.58 ; pages=4357–63 ; doi:10.1093/jxb/erm302 ; PMID:18182437
- ↑ ;Brevet Cell culture (Class 435/297.400)
- (en) Brevet U.S. 5104802, Rhodes, Percy H. (Huntsville, AL), Miller, Teresa Y. (Falkville, AL), Snyder, Robert S. (Huntsville, AL) , " Hollow fiber clinostat for simulating microgravity in cell culture"
- ↑ F.G.J.R. von Sachs (1879) Ueber Ausschliessung der geotropischen und heliotropischen Krümmungen wärend des Wachsthums, Würzburger Arbeiten. 2, pp. 209–225
- ↑ F.C. Newcombe (1904) Limitations of the klinostat as an instrument for scientific research, Science 20, pp. 376–379.
- ↑ Page sur les matériel expérimental d'étude de la microgravité
- ↑ B.G. Pickard (1973) "Geotropic response patterns of the Avena coleoptile. I. Dependence on angle and duration of stimulation". Can. J. Bot. 51: 1003-1021
- ↑ C.J. Lyon (1970) Choice of rotation rate for the horizontal clinostat, Plant Physiol. 46, pp. 355–358
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