Fluorophores

Fluorophores

Fluorochrome

Un fluorochrome ou fluorophore est une substance chimique capable d'émettre de la lumière de fluorescence après excitation. Ce sont des substances composées de plusieurs noyaux aromatiques conjugués ou encore des molécules planes et cycliques qui possèdent une ou plusieurs liaisons pi.

Sommaire

Applications

L'utilisation de fluorochromes en biologie moléculaire est un peu plus récente que celle d'isotopes radioactifs. Elle a l'avantage de donner des résultats très rapidement, voire immédiatement, en s'affranchissant des longs temps d'exposition requis pour la technique par radioactivité. La fluorescence a le désavantage de ne pas être permanente, l'intensité de la fluorescence diminuant avec le temps jusqu'à devenir indétectable.

On utilise divers fluorochromes en fonction des applications. Leur emploi à la technique du séquençage a permis d'automatiser et de mettre au point les séquenceurs de gènes modernes, ayant servis aux projets de séquençage de génomes entiers. On doit utiliser quatre fluorochromes différents pour discriminer les quatre bases de l'acide désoxyribonucléique.

L'utilisation de la fluorescence en couplage avec une machine à PCR (thermocycleur) est un développement récent. On appelle ces machines "appareil de PCR en temps réel". Le fluorochrome le plus utilisé est le Sybr-green.

Les fluorochromes sont utilisés dans plusieurs marquages immunologiques : cytométrie en flux, immunofluorescence. Les plus utilisés sont la phycoérythrine (PE), Fluorescéine isothiocyanate (FITC), la gamme d'Alexa Fluor, la Protéine fluorescente verte (green fluorescent protein, GFP).

Liste de fluorophores

fluorophores conjugués

fluorophore Ex (nm) Em (nm) PM Notes
Hydroxycoumarin 325 386 331 Succinimidyl ester
Aminocoumarin 350 445 330 Succinimidyl ester
Methoxycoumarin 360 410 317 Succinimidyl ester
Cascade Blue (375);401 423 596 Hydrazide
Pacific Blue 403 455 406 Maleimide
Pacific Orange 403 551
Lucifer yellow 425 528
NBD 466 539 294 NBD-X
R-Phycoerythrin (PE) 480;565 578 240 k
PE-Cy5 conjugates 480;565;650 670 aka Cychrome, R670, Tri-Color, Quantum Red
PE-Cy7 conjugates 480;565;743 767
Red 613 480;565 613 PE-Texas Red
PerCP 490 675 Peridinin chlorphyll protein
TruRed 490,675 695 PerCP-Cy5.5 conjugate
FluorX 494 520 587 (GE Healthcare)
Fluorescein 495 519 389 FITC; pH sensitive
BODIPY-FL 503 512
TRITC 547 572 444 TRITC
X-Rhodamine 570 576 548 XRITC
Lissamine Rhodamine B 570 590
Texas Red 589 615 625 Sulfonyl chloride
Allophycocyanin (APC) 650 660 104 k
APC-Cy7 conjugates 650;755 767 PharRed

Alexa Fluor dyes (lié à un anticorps) [1]

fluorophore Ex (nm) Em (nm) PM Quencher
Alexa Fluor 350 343 442 410
Alexa Fluor 405 401 421 1028
Alexa Fluor 430 434 540 702
Alexa Fluor 488 499 519 643 QY 0.92
Alexa Fluor 500 503 525 700
Alexa Fluor 514 517 542 714
Alexa Fluor 532 530 555 724 QY 0.61
Alexa Fluor 546 561 572 1079 QY 0.79
Alexa Fluor 555 553 568 1250 QY 0.1
Alexa Fluor 568 579 603 792 QY 0.69
Alexa Fluor 594 591 618 820 QY 0.66
Alexa Fluor 610 610 629 1285
Alexa Fluor 633 632 648 1200
Alexa Fluor 647 652 668 1300 QY 0.33
Alexa Fluor 660 663 691 1100
Alexa Fluor 680 680 702 1150
Alexa Fluor 700 696 719 1400
Alexa Fluor 750 752 776 1300
Alexa Fluor 790 782 804 1750

Cy Dyes [2]

fluorophore Ex (nm) Em (nm) PM Quencher
Cy2 489 506 714 QY 0.12
Cy3 (512);550 570;(615) 767 QY 0.15
Cy3B 558 572;(620) 658 QY 0.67
Cy3.5 581 594;(640) 1102 QY 0.15
Cy5 (625);650 670 792 QY 0.28
Cy5.5 675 694 1128 QY 0.23
Cy7 743 767 818 QY 0.28

Marqueurs des acides nucléiques

fluorophore Ex (nm) Em (nm) PM Notes
Hoechst 33342 343 483 616 AT-selective
DAPI 345 455 AT-selective
Hoechst 33258 345 478 624 AT-selective
SYTOX Blue 431 480 ~400 DNA
Chromomycin A3 445 575 CG-selective
Mithramycin 445 575
YOYO-1 491 509 1271
Ethidium Bromide 493 620 394
Acridine Orange 503 530/640 DNA/RNA
SYTOX Green 504 523 ~600 DNA
TOTO-1, TO-PRO-1 509 533 Vital stain, TOTO: Cyanine dimère
TO-PRO: Cyanine monomère
Thiazole Orange 510 530
Propidium Iodide (PI) 536 617 668.4
LDS 751 543;590 712;607 472 DNA (543ex/712em), RNA (590ex/607em)
7-AAD 546 647 7-aminoactinomycin D, CG-selective
SYTOX Orange 547 570 ~500 DNA
TOTO-3, TO-PRO-3 642 661
DRAQ5 647 681,697 413 (Biostatus) (usable excitation down to 488)

Marqueurs de fonctions cellulaires

fluorophore Ex (nm) Em (nm) PM Notes
Indo-1 361/330 490/405 1010 AM ester. Low/High Ca++,
Fluo-3 506 526 855 AM ester. pH > 6
DCFH 505 535 529 2'7'Dichorodihydrofluorescein, oxidized form
DHR 505 534 346 Dihydrorhodamine 123, oxidized form, light catalyzes oxidation
SNARF 548/579 587/635 pH 6/9

Protéines fluorescent

fluorophore Ex (nm) Em (nm) PM QY BR PS Notes
Y66H 360 442
Y66F 360 508
EBFP 380 440 0.18 0.27 monomère
EBFP2 383 448 20 monomère
Azurite 383 447 15 monomère
GFPuv 385 508
T-Sapphire 399 511 0.60 26 25 weak dimère
Cerulean 433 475 0.62 27 36 weak dimère
mCFP 433 475 0.40 13 64 monomère
ECFP 434 477 0.15 3
CyPet 435 477 0.51 18 59 weak dimère
Y66W 436 485
mKeima-Red 440 620 0.24 3 monomère (MBL)
TagCFP 458 480 29 dimère (Evrogen)
AmCyan1 458 489 0.75 29 tetramère; (Clontech)
mTFP1 462 492 54 dimère
S65A 471 504
Midoriishi Cyan 472 495 0.9 25 dimère (MBL)
Wild Type GFP 396,475 508 26k 0.77
S65C 479 507
TurboGFP 482 502 26 k 0.53 37 dimère; (Evrogen)
TagGFP 482 505 34 monomère (Evrogen)
S65L 484 510
Emerald 487 509 0.68 39 0.69 weak dimère; (Invitrogen)
S65T 488 511
EGFP 488 507 26k 0.60 34 174 weak dimère; (Clontech)
Azami Green 492 505 0.74 41 monomère (MBL)
ZsGreen1 493 505 105k 0.91 40 tetramère; (Clontech)
TagYFP 508 524 47 monomère (Evrogen)
EYFP 514 527 26k 0.61 51 60 weak dimère; (Clontech)
Topaz 514 527 57 monomère
Venus 515 528 0.57 53 15 weak dimère
mCitrine 516 529 0.76 59 49 monomère
YPet 517 530 0.77 80 49 weak dimère
TurboYFP 525 538 26 k 0.53 1.65 dimère; (Evrogen)
ZsYellow1 529 539 0.65 13 tetramère; (Clontech)
Kusabira Orange 548 559 0.60 31 monomère (MBL)
mOrange 548 562 0.69 49 9 monomère
mKO 548 559 0.60 31 122 monomère
TurboRFP 553 574 26 k 0.67 62 dimère; (Evrogen)
tdTomato 554 581 0.69 95 98 tandem dimère
TagRFP 555 584 50 monomère (Evrogen)
DsRed monomère 556 586 ~28k 0.1 3.5 16 monomère; (Clontech)
DsRed2 ("RFP") 563 582 ~110k 0.55 24 (Clontech)
mStrawberry 574 596 0.29 26 15 monomère
TurboFP602 574 602 26 k 0.35 26 dimère; (Evrogen)
AsRed2 576 592 ~110k 0.21 13 tetramère; (Clontech)
mRFP1 584 607 ~30k 0.25 monomère; (Tsien lab)
J-Red 584 610 0.20 8.8 13 dimère
mCherry 587 610 0.22 16 96 monomère
HcRed1 588 618 ~52k 0.03 0.6 dimère; (Clontech)
Katusha 588 635 23 dimère
mKate (TagFP635) 588 635 15 monomère (Evrogen)
TurboFP635 588 635 26 k 0.34 22 dimère; (Evrogen)
mPlum 590 649 0.10 4.1 53
mRaspberry 598 625 0.15 13 monomère; faster photobleach than mPlum

Notes et références

Voir aussi


FPbeachTsien.jpg Fluorophores
Protéines fluorescentes GFP • RFP • CFP • YFP
Marqueurs fluorescent des acides nucléiques Bromure d'éthidium • DAPI
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