Isoélectrofocalisation
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Isoélectrofocalisation
L'isoélectrofocalisation, ou méthode de focalisation électrique, permet de séparer des protéines qui ne diffèrent que par une seule charge. On l'utilise notamment lors de l'électrophorèse bidimensionnelle, après avoir séparé les protéines en fonction de leur charge électrique globale dans un gradient de pH en absence de laurylsulfate de sodium (solvant conférant aux protéines une charge négative). Pour la solubilisation des protéines, on utilise : un détergent non chargé (Triton 100X), le bêta-mercaptoéthanol (rompant les ponts disulfure) et l'urée (dénaturant les protéines sans leur conférer de charge). On fait migrer les protéines soumises à un gradient de pH dans un tube de gel de polyacrylamide en leur appliquant un champ électrique. Les protéines vont présenter au niveau d'un certain pH, appelé point isoélectrique une charge globale nulle (la protéine est neutre). On a donc séparé les protéines en fonction de leur point isoélectrique.
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Catégorie : Biologie moléculaire
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