- SELEX
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La méthode Systematic Evolution of Ligands by EXponential enrichment (SELEX), est une méthode de sélection in vitro, à partir de banques combinatoires d'oligonucléotides synthétiques. Les oligonucléotides selectionnés sont capables de fixer sélectivement un ligand donné, avec une affinité élevée et spécifique. Initialement mise au point avec des ARN, cette technique à ensuite été généralisée aux oligonucléotides ADN.
Principe
La technique SELEX nécessite une bibliothèque d'oligonucléotides dont la séquence aux extrémités 5' et 3' est connue et dont la séquence centrale est aléatoire. Cette collection d'oligonucléotide est préparée selon le même principe de synthèse d'oligonucléotide à la différence que lors des étapes d'élongation des nucléotides de la région centrale, les quatre bases sont mises à réagir au lieu de ne mettre qu'une seule base. Cette technique permet d'obtenir une collection d'oligonucléotides avec des séquences centrales différentes.
Le principe de SELEX est de sélectionner les oligonucléotides qui se lient avec une plus haute affinité avec une cible. Une chromatographie d'affinité est utilisée permet de sélectionner ces oligonucléotides. Ensuite les oligonucléotides sont séparés de la molécules d'intérêt et sont amplifiés par clonage ou par PCR. L'étape de sélection des oligonucléotides avec une grande affinité pour la molécule cible et l'étape d'amplification sont répétés plusieurs fois afin d'obtenir des oligonucléotides ayant la haute affinité pour la cible. Les oligonucléotides selectionnés sont appelé des aptamères. La technique SELEX fournit de bons résultats des oligonucléotides avec une constante de dissociation très faible sont obtenus.
Utilisation
La technique SELEX permet d'obtenir des oligonucléotides ayant une affinité pour des cibles très différentes (ion, petite molécule; protéine, organite, cellule). Les oligonucléotides obtenus ont une haute affinité et une haute spécificité et présentent donc un intérêt potentiel dans le diagnostic et la thérapie de maladies.
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