Coloration au bleu de trypan

La coloration au bleu de trypan est une méthode de coloration des cellules mortes.

Principe

Molécule du bleu de trypan

Le colorant utilisé, le bleu de trypan, a tendance à entrer dans les cellules qu'il rencontre. Une fois dans la cellule, la molécule en question entraîne un mécanisme d’exclusion qui va éjecter cette molécule dans le milieu extérieur. Ce mécanisme nécessitant de l’énergie, seules les cellules possédant une source d’ATP peuvent le mettre en place. Ainsi, une cellule vivante expulsera la molécule et restera blanche au microscope, au contraire une cellule morte n’aura pas les moyens de la rejeter et restera bleue.

Une autre explication réside dans le fait que chez une cellule vivante, la membrane intacte empêche l'entrée de la coloration dans le cytoplasme, alors qu'au contraire chez une cellule morte, la membrane lésée laisse passer le colorant ce qui aboutit à la coloration de la cellule en bleu.

Cependant, cette molécule étant toxique, elle finit par tuer les cellules qui deviennent alors toutes bleues.

Utilisation

Observation au microscope optique de Hyaloperonospora parasitica dans une feuille d'Arabidopsis thaliana en utilisant une coloration au bleu de trypan.

Cette méthode est couramment utilisée lors de numération cellulaire. On utilise alors un hémacytomètre afin de compter les cellules dans un volume précis.

On peut également utiliser cette coloration pour visualiser les cellules mortes et les hyphes de champignon et Stramenopiles.

Cette méthode ne permet pas de distinguer les cellules mortes par apoptose des cellules nécrosées.

Quelques exemples

Source

• [1]
• Viable Cell Counts Using Trypan Blue