Coagulase libre

G X50 000 (MET technique par cryofracture)
S.aureus formant une capsule de fibrine qui le protège du système immunitaire d'une vache

La coagulase ou Staphylocoagulase est une enzyme capable de faire coaguler le plasma sanguin. La mise en évidence de la Coagulase dans un bouillon de culture de Staphylococcus est considérée comme un critère absolu d'identification de Staphylococcus aureus en médecine humaine. En médecine vétérinaire, d'autres germes peuvent avoir une réaction positive, notamment Staphylococcus intermedius.

On distingue deux types de coagulase :

• La coagulase liée ou "clumping factor" adhérant au corps microbien.
• La coagulase libre ou staphylocoagulase, une éxoenzyme, propre à certaines espèces du genre Staphylococcus.

Principe

Le principe de ce test est simple. On met en contact du plasma oxalté, incapable de coaguler seul, avec un peu de bouillon Cœur-Cervelle où a été cultivé le germe étudié.Si le fibrinogène, soluble dans le plasma, se transforme en fibrine solide, un caillot se formera au fond du tube.

On peut également réaliser ce test par un agglutination sur lame. Sur une lame propre et sèche, on met en contact une goutte de Plasma sanguin oxalté avec une goutte de bouillon ensemencé par le germe étudié (ou 1 colonie). Si le germe possède le Récepteur au fibrinogène, il y aura une agglutination visible à l'oeil nu.

Technique

Dans un tube à hémolyse stérile:

• verser 0.5 ml de bouillon Cœur-Cervelle.
• verser 0.5 ml de plasma oxalaté.
• Homogéniser et incuber à 35 - 37°C

Remarques : Si le test est effectué avec un autre bouillon autre que le bouillon Cœur-Cervelle, il est indispensable de réaliser un témoin négatif en mélangeant du bouillon + plasma oxalaté afin de vérifier que ce bouillon ne coagule pas lui même le plasma stérile. l'observation est possible à partir de 2h d'incubation.

Si le test est effectué sur lame, il faut également vérifié la non autoagglutionation de bouillon ou de la colonie testé.

Résultats

Si le plasma coagule en moins de 24h, le germe posséde une coagulase.

• Si le plasma est coagulé ( pas d'écoulement ) la fibrinogène a été transformé en fibrine : Staphylococcus aureus.
• Si le plasma n'est pas coagulé, espèce autre que Staphylococcus aureus. Poursuivre avec d'autres tests biochimiques tels que la catalase, l'oxydase, l'indole ou faire une identification.

Coagulase positive