- Blot (Biologie)
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Transfert (biologie moléculaire)
Le transfert en biologie moléculaire désigne un ensemble de techniques permettant de rechercher la présence d'une molécule déterminée (ADN , ARN, protéines...) dans un milieu. Elles consistent à transférer les molecules à analyser sur un support solide (par exemple, une membrane de nitrocellulose ou de nylon) puis à utiliser une sonde spécifique (fragment d'ADN ou d'ARN, anticorps...) de la cible recherchée [1]. Ces techniques, bien que datant des années 70, restent régulièrement utilisées en recherche ou en clinique.
Sommaire
Historique
La première technique de transfert de molécules fut développée en 1976 par Edwin Southern. L'ADN génomique était dénaturé et découpé puis les fragments obtenus était séparés par électrophorèse. Après transfert sur une membrane, la détection était réalisée par des sondes d'ADN radioactives.
Cette technique fut ensuite adaptée pour d'autres type de molécules : l'ARN et les protéines puis, plus récemment, pour les lipides ou pour l'analyse des interactions inter-moléculaires.
Actuellement, d'autres techniques d'analyse commencent à remplacer certaines techniques de transfert. Par exemple, la PCR (1983) et les puces à ADN pour l'analyse de l'ADN et de l'ARN.
Terminologie
Le transfert d'ADN est désigné en anglais par Southern blot, en hommage à son inventeur. Les autres techniques sont appelées northern blot pour l'ARN, western blot pour les protéines et eastern blot pour les lipides (en référence, de façon humoristique, aux 4 points cardinaux : north, south, east et west en anglais). Seul le mot Southern provient d'un nom propre et prend une majuscule.
En français, il est recommandé[2][3][4] d'utiliser, par exemple pour les protéines, les termes transfert de protéines ou transfert de western. Le nom anglais des techniques est très souvent utilisé dans la littérature ou dans les laboratoires.
Le terme buvardage est parfois rencontré (en référence à la traduction littérale de blot signifiant tâche ou sécher, passer un buvard sur[5]). Cependant, buvardage est un néologisme peu utilisé.
Principe
Principe des techniques de transfert de molécules
Ces techniques se déroulent en général en 3 ou 4 étapes (la première étape, la séparation, étant optionnelle).
- La séparation des molécules à analyser, en général par une électrophorèse.
- Le transfert proprement-dit des molécules depuis le gel sur une membrane.
- L'hybridation avec une ou plusieurs (multiplexe) sondes marquées.
- La détection des sondes.
Voir aussi les techniques spécifiques
- Transfert d'ADN.
- Transfert d'ARN.
- Transfert de protéines.
- Dot blot, similaire aux transferts d'ADN, d'ARN ou des protéines mais sans la première étape de séparation.
- Far-eastern blot pour l'analyse des lipides.
- Far-western blot pour l'analyse des interactions protéines-protéines.
- Southwestern blot pour l'analyse des interactions ADN-protéines.
Références et notes
- ↑ L'utilisation de sondes spécifiques directement dans un gel d'electrophorèse n'est pas possible pour des raisons techniques
- ↑ Recommandations pédagogique (Ressources nationales de chimie du Ministère de l'éducation et de la recherche).
- ↑ Vocabulaire de génétique (Journal officiel du 23 septembre 2006).
- ↑ Le grand dictionnaire terminologique (Office québécois de la langue française).
- ↑ http://dictionnaire.reverso.net/anglais-francais/blot
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