Gélose tryptone soja

La gélose tryptone soja est utilisée comme base destinée à être additionnée de sang. Elle est spécialement conçue pour mettre en évidence les réactions bactério-hémolytiques pour les streptocoques des groupes A et B de Lancefield et pour favoriser la croissance des germes particulièrement exigeants aérobies et anaérobies. Elle est également utilisée pour pratiquer le test de CAMP.

Principes

L'association de peptone de caséine-peptone de soja permet l'obtention d'une croissance optimale qui est due à la synergie réalisée entre l'apport protidique de la caséine et l'apport glucidique du soja.

Le chlorure de sodium (NaCl) maintien la pression osmotique.

Le sang de mouton défibriné stérile utilisé pour enrichir le milieu, favorise l'obtention des hémolyses bêta caractéristiques de Streptococcus pyogènes et de Streptococcus agalactiae .

L'addition de 5 % de sang de cheval apporte les facteurs X et V nécessaires à la croissance d'Haemophilus influenzae.

Par adjonction de gentamicine (antibiotique du groupe des aminoglycosides ) à raison de 2,5 mg/L de milieu additionné de sang de mouton, on réalise une gélose qui, tout en facilitant la détection de Streptococcus pneumoniae dans les prélèvement cliniques, inhibe les bactéries contaminantes comme les Staphylocoques et les bacilles Gram négatifs.

Formule

(en grammes par litre d'eau distillée) :

• Tryptone : 15
• Peptone papaïnique de soja : 5
• Chlorure de sodium : 5
• Agar bactériologique : 15
• pH final : 7,3 ± 0,2

Lecture : Les streptocoques hémolytiques du groupe A apparaissent sous la forme de petites colonies grises translucides ou opaques entourées d'une zone d'hémolyse bêta. D'autre bactéries peuvent présenter le même type d'hémolyse : les Listeria,les staphylocoques hémolytique Escherichia coli et les Pseudomonas. Il est donc nécessaire de pratiquer des colorations de Gram pour confirmer les résultats. Les streptocoques qui présentent les caractéristiques suivantes :

• Bacitracine-négative
• CAMP-positive
• Bêta-hémolytique

sont considérés comme appartenant présomptivement au groupe B. Il est possible de réaliser le test de CAMP sur le milieu additionné de 5% de sang de mouton de la manière suivante :

• Ensemencer en une seule strie médiane une culture de 10 heures de Staphylococcus aureus ATCC 33862 bêta-hémolytique.
• Perpendiculairement à la strie initiale, faire une strie de culture du streptocoque à déterminer, de façon à approcher le plus possible (2 à 3 mm) sans toutefois l'atteindre.

Les streptocoques du groupe B produisent une substance extracellulaire thermorésistante (CAMP factor) qui provoque un triangle d'hémolyse totale dans la zone d'hémolyse incomplète du staphylocoque, à la jonction des deux cultures. La procédure doit être effectuée avec des souches de collection connues, parallèlement aux souches inconnues à identifier. les streptocoques du groupe B présentent généralement des zones hémolytiques plus petites que celles observées avec streptococcus pyogenes.

Les pneumocoques apparaissent sous forme de colonies plates, lisses, grisâtres et parfois muqueuses entourées d'une zone d'hémolyse étroite verdâtre, de type alpha.

Les staphylocoques donnent des colonies opaques jaune-doré ou blanches avec ou sans zone d'hémolyse de type Bêta.

Les Listeria présentent de petite zones d'hémolyse bêta.

Les autres germes non pathogènes peuvent également cultiver sur ce milieu non sélectif.

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