- Tryptone sulfite néomycine
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Milieu pour la détection et l’énumération de Clostridium perfringens.
Composition
Composant Qté (g/L) Peptone trypsique 10 NaCl 5 Extrait de viande 2 Extrait de levure 5 Chlorhydrate de cystéine (rend le milieu très réducteur) 0,3 Agar 15 % Mode d’action
Le milieu TSN est une gélose sélective, elle exploite le fait que Clostridium perfringens est résistant à la polymyxine, la néomycine (antibiotiques) et qu’il a le pouvoir de réduire les sulfites. La croissance des autres Clostridia sulfito réducteurs est presque totalement inhibée car la flore d’accompagnement est largement supprimée. Ce milieu contient 1 critère de différenciation : le sulfite de sodium dont la réduction est révélée par fer (précipitation du sulfure de fer), forme une colonie noire. La température d’incubation permet de sélectionner : - à 37°C → dénombrement des formes végétatives de Cl. perfringens. - à 46°C → dénombrement de Clostridium perfringens. L’incubation se fait en anaérobiose.
ensemencement
se placer en milieu stérile : hôtte ou bec Bunsen
réaliser la dilution nécessaire en eau physiologique ou dans du tampon PBS
introduire 1 mL de la suspension bactérienne dans une boite de petri stérile
ajouter 15 mL de gélose en surfusion (46°C)
laisser la gélose se solifier
couler une double couche (10 mL de gélose)
placer la boite de pétri dans une jarre hermétiquement fermée contenant un réactif générateur d'une atmosphère anaérobie (acide ascorbique par exemple) et un témoin de cette atmosphère modifiée incuber la jarre à 37°C ou 46°C pendant 18 à 24 heures
les colonies produisant un pigment noir diffusible sont des bactéries anaérobies sulfito réductrices et peut-être clostridium perfringens.
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